我养的细胞是如何离开人世的……
我叫林平之,是莫愁师姐的师弟,过完国庆,轻松了一周啊,爽!昨天铺板种的细胞,今天打开培养箱的时候,哈哈哈哈……哈你妹啊,我的细胞全部告别人世了……享年九十六岁,过早地离开了我们。(Hela细胞……)
还有几盘好像长得好慢,感觉还能抢救一下样的,师姐,到底是怎么回事呢……
莫愁:一般打开培养箱,看到细胞傻眼会有这样几种情况哈:
1)培养基颜色变了,细胞挂了
2)细胞不贴壁,细胞挂了
3)细胞生长缓慢,细胞挂了一部分
4)细胞全挂了
我们一个个来看,首先是培养基颜色变了,这个非常简单,就是pH变了,导致细胞挂了。长假过后经常会出现这样的情况,有好多是忘了开二氧化碳的气阀。没二氧化碳,很容易导致培养基的酸碱平衡体系产生变化,培养基pH上升,培养基就变紫了。当然,除了二氧化碳的气阀,还有你的培养瓶的瓶盖是不是拧得特别紧,太紧的话,也是会pH上升的。所以有的时候不是越紧越好的……
细胞污染也会使得培养基颜色产生变化,比如,一晚上就变黄,就基本上是污染了。支原体污染,也会导致培养基颜色变化。这样的细胞,要么扔掉,要么你觉得还能抢救一下,就再抢救一下试试看。具体怎么抢救,以后再说。
细胞的衰老和初始接种细胞量太低,也可能会导致培养基的pH产生差异。老化的细胞,就只能扔了。培养基也需要注意,培养基和血清不要暴露在外面太久,否则也一样会导致培养基pH变化,使得细胞离开人世……
接着是细胞不贴壁,这个也是常见的傻眼模式,为啥细胞会不贴壁么?简单讲,可能就是因为你胰酶消化过度了。这样会损伤细胞,使之无法贴壁。除此之外,就是细胞中可能会有一些支原体的污染了。细胞铺板时的密度太高或者太低,也会有这样的情况发生。当然,还有细胞老化,或者冻存细胞时的损伤,也会导致细胞无法贴壁,这样的细胞,只能扔了,因为可能会影响后续实验。还有一点必须要注意的是,血清要是过期了或者变质,会导致血清中的细胞粘附因子的失活,当然一般保存得当应该问题不大。
细胞生长缓慢的话,比较可能的是细胞在冻存复苏的过程中有了较大的损伤。或者是在培养基中的一些促细胞生长的因子,比如谷氨酰胺耗尽。当细胞铺板的密度过高或者过低的情况下,也会导致细胞生长缓慢。
一般来说,96孔板铺板的细胞大约保持在每孔5k左右,6孔板铺板在每孔5w到10w个细胞左右,24孔板在1w-2w个细胞。(划痕实验和耐药实验除外哈,这两个实验都是要细胞长到80%的,以六孔板为例,6孔板中每孔细胞长满后,大约是100w-150w个)
细胞要是直接挂了,那就综合一下之前的几点就行了,差不多就这么几种可能让你的细胞全部走完漫长的毛一百年的生命,告别人世了……当然,还有你的细胞,如果不及时换液的话,或者为了抢救细胞,抗生素加过量的话,一样会让细胞挂干净的。
…华丽丽的分割线…
李莫愁博士:长假过完,收收心,该复苏的就要复苏,但是一定要注意各种情况。养细胞就跟做铲屎君差不多,要贴心地为他们服务,这样才能让他们长命百岁……好了,今天就策到这里吧。